Dirección de Pregrado
Alameda 340, Patio interior
Tel (56-2) 354 6416
(56-2) 3543 817
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Dirección de Postgrado
Lira 44, 1° piso,
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Fono: (56-2) 354 6412

(56-2) 354 3401
postgrado.medicina@uc.cl
 

Dirección de Extensión,
Educación Continua y RRII

Diagonal Paraguay 362, piso -1,
Santiago, Chile
Fono: (56-2) 354 6425
(56-2) 354 6430
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Dirección de Investigación
Lira 44, 2° piso,
Santiago, Chile
Fono: (56-2) 354 8170
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Unidad de Microscopía Imprimir E-mail

Unidad de Asesoría Estadistica
Sistemas de Registro Electrónico (Redcap)
Unidad de Apoyo a Investigaciones Clínicas
Análisis Masivo de Datos Genómicos 
Unidad de Apoyo en Estudios con Animales de Experimentación
Unidad de Microscopía


La Unidad de Microscopía del Centro de Investigaciones Médicas ofrece un servicio integral que de acuerdo a las necesidades del investigador. En la Unidad se dispone de diversos equipos ópticos dedicados a técnicas especificas y personal especializado en microscopía y análisis de imágenes.

El propósito de esta Unidad es apoyo y fortalecimiento de programas de postrado y doctorado de las diversas facultades de la Universidad, además de su uso en investigación. El servicio también se ofrece a terceros si existe la capacidad y tiempo libre del instrumental.

Los equipos de esta Unidad ha sido adquiridos con el financiamiento otorgado por el proyecto MECESUP No. PUC0815 otorgado a la Vicerrectoría Académica para los fines de docencia e investigación, de acuerdo a lo definido en el proyecto.

Asesoría a investigadores

Como todos los investigadores tienen diferentes necesidades, proporcionarles una asesoría especifica y personalizada es indispensable para asegurar los resultados científicos obtenidos luego del trabajo realizado con el equipamiento de la Unidad de Microscopía. Esta asesoría se traduce en un seguimiento constante, desde la planificación de experimentos hasta el análisis de resultados. Con este servicio, los investigadores podrán discutir la estrategia a seguir para responder a su pregunta científica objetivo, conocer las ventajas y limitaciones de la técnica para así evaluar correctamente los datos obtenidos y conocer las variables a considerar o artefactos de la técnica involucrados en el proceso que pueden alterar sus datos. Este servicio comprende, por ejemplo:

Refinar los métodos de investigación al aplicar la técnica adecuada, identificar artefactos y limitaciones de la técnica. Una técnica adecuada involucra, por ejemplo, la correcta selección de fluoróforos, preparación de la muestra y la selección de fluoróforos o tinciones apropiada.

-  Aplicar el método de análisis de datos adecuado a la técnica utilizada mediante técnicas de procesamiento de imágenes. Esto comprende el procesamiento de imágenes en distintos software e, incluso, el desarrollo de algoritmos específicos si es requerido, para obtener los resultados deseados.

-  Revisión de imágenes para publicación científica: chequeo de imágenes previas a revisión, edición de acuerdo a los estándares de ética de imágenes establecidos en la comunidad científica y mejora para versiones impresas como posters para congresos.

Que servicios ofrece?

La unidad de microscopía tiene a disposición de los investigadores los siguientes servicios:

- Microscopio Carl Zeiss Axio Imager. Fluorescencia con lampara halógena para 4 canales (multiple, rojo, verde y azul).

Microscopio vertical Carl Zeiss modelo Axio Imager A1, equipado para campo claro y fluorescencia con los siguientes objetivos:

2.5x NA 0.06 APlan
4x NA 0.10 AchroPlan
10x NA 0.25 AchroPlan
20x NA 0.45 AchroPlan
40x NA 0,65 AchroPlan
100x NA 1.25 Oil AchroPlan

Cámara CCD AxioCam MRc 5 color chip 2/3”, 2584H x 1936V de 5 mega pixeles y frame rate de 3 a 16 fps, salida digital de 12 bits. Binning de 1x1 hasta 10x10 para mayor sensibilidad.

Cuatro canales de fluorescencia para rojo, verde y azul, con los siguientes sets de filtros:

Multiples colores: Zeiss filter set 25
Excitación: 400 + 495 + 570 ,  Emisión: 460 + 530 + 625
Lista de Fluoroforos apropiados:

5-(and-6)-Carboxy-2', 7'-dichlorofluorescein

Cascade Yellow

FlAsH

Nile Red

5-FAM

CFDA

Fluo-3

Nissl

5-ROX

CFP

Fluo-4

Oregon Green 488

6-Carboxyrhodamine 6G

CI-NERF

Fluorescein

Pacific Blue

Acridine Orange

Cy 2

Fluoro-Emerald

PicoGreen

Alexa 430

Cy 3.5

FM 1-43

PO-PRO-1

Alexa 488

CyQUANT GR-DNA

Fura Red

POPO-1

Alexa 568

Dapoxyl (2-aminoethyl) sulfonamide

GFP

Propidium Iodide

Alexa 594

DDAO

HcRed

ReAsH

Alexa Fluor 610

Di-8 ANEPPS

Lucifer Yellow

Rhodamine 110

Auramine O

DM-NERF

LysoSensor Yellow

Rhodamine 123

BCECF

DTAF

Magnesium Green

Rhodamine Green

BFP

dTomato

mCherry

Rhodamine Red-X

BO-PRO-3-DNA

DyLight 488

mHoneydew

Rhodol Green

BOBO-3-DNA

DyLight 594

MitoTracker Green

Sapphire

BODIPY FL

eCFP

MitoTracker Red

Sodium Green

BODIPY TR-X

eGFP

mNeonGreen

Sulforhodamine 101

BOPRO-3

Ethidium Bromide

mPlum

SYBR Green I

Calcein

Ethidium homodimer

mRFP

SYTO 13-DNA

Calcium Crimson

eYFP

mStrawberry

Texas Red-X

Calcium Green

FDA

mTangerine

YO-PRO-1-DNA

Carboxynaphthofluorescein

FITC

NeuroTrace 500/525

YOYO-1-DNA

Verde: Zeiss filter set 09
Excitación: 450-490 ,  Emisión: LP 515
Lista de fluoroforos apropiados

 

5-FAM pH 9.0

DyLight 488

FM 1-43

Rhodamine 110

Alexa 430

EGFP / GFP

FM 4-64

Rhodol Green

Alexa 488

evoglow-Bs1

Fura Red

SYBR Green I

BCECF pH 5.5

evoglow-Bs2

LysoSensor Green

SYPRO Ruby

Calcein

evoglow-Pp1

mHoneydew

SYTO 13-DNA

CFDA

FDA

MitoTracker Green

YO-PRO-1-DNA

CI-NERF pH 2.5

FITC

NBD-X

YOYO-1-DNA

Di-8 ANEPPS

Fluo-4

NeuroTrace 500/525

 

DM-NERF pH 4.0

Fluorescein

Nissl

 

DTAF

Fluoro-Emerald

Rhodamine Green

 

 

Rojo: Zeiss filter set 15
Excitación: 546/12 , Emisión: LP 590
Lista de fluoroforos apropiados:

5-TAMRA

Calcium Orange Ca2+

Fluor-Ruby

Rhod-2

5-TAMRA pH 7.0

dTomato

Magnesium Orange

Rhod-2 Ca2+

Alexa Fluor 610 R-phycoerythrin streptavidin pH 7.2

Ethidium Bromide

MitoTracker Orange, MeOH

Rhodamine phalloidin pH 7.0

Alexa Fluor 647 R-phycoerythrin streptavidin pH 7.2

Ethidium homodimer

Nile Red

Tetramethylrhodamine antibody conjugate pH 8.0

Calcium Orange

Fluor-Ruby

Propidium Iodide

Tetramethylrhodamine dextran pH 7.0

 

Rojo: Zeiss filter set 45
Excitación: 560/40 , Emisión: 630/75
Lista de Fluoroforos apropiados

5-ROX

Carboxynaphthofluorescein

LysoTracker Red

Nile Red

Alexa Fluor 568

Cy 3.5

mCherry

Propidium Iodide

Alexa Fluor 610

dTomato

MitoTracker Red

Resorufin

Alexa Fluor 647

Ethidium Bromide

mPlum

Rhodamine Red-X

BOBO-3-DNA

Fluor-Ruby

mRFP

Sulforhodamine 101

BODIPY TR-X

HcRed

mStrawberry

Tetramethylrhodamine dextran

BOPRO-3

Lissamine rhodamine

mTangerine

X-Rhod

 

Software AxioVision Version 4.8

Con este software de adquisición se pueden controlar los componentes del sistema Axio Imager, toda la configuración del microscopio y pasos de procesamiento se pueden ajustar rápido y fácilmente gracias a su interfaz. AxioVision permite visualizar y presentar las imágenes adquiridas en distintas dimensiones, así como realizar procesamiento básico de imágenes.

Microscopio Olympus BX51 con sistema para estereología. Platina motorizada. Fluorescencia con lampara halógena para 3 canales (rojo, verde y azul). Software Stereo Investigator.

Microscopio vertical Olympus modelo BX51 equipado para campo claro, campo oscuro, contraste de fases y fluorescencia. Cuenta con los siguientes objetivos:

- 2x NA 0.06 Plan N
- 4x NA 0.13 UPlan FL
N
- 10x NA 0.30 Ph1 UPlan FL N
- 20x NA 0.50 Ph1 UPlan FL N
- 40x NA 0.75 Ph2  UPlan FL N
- 60x NA 1.42 Oil PlanApo N

Sistema motorizado: platina motorizada en ejes x, y, z controlado por el computador con joystick, carrusel motorizado de filtros para adquisición multicanal automatizada.

Cámaras dedicadas para adquisición en campo claro (color) y fluorescencia (monocromatica).

- Camara CCD (Kodak) color 1600H x 1200V de 1.92 mega pixeles y frame rate de 7,5 fps (maximo de 190 fps con binning de 8x8 y ROI). Binning de 2x2, 4x4 y 8x8.

- Camara CCD (Sony) monocromatica digital enfriada, chip 2/3”, 1392H x 1040V de 1.4 mega pixeles y frame rate de 10 fps (maximo de 165 fps con un binning de 8x8 y ROI), salida digital de 12 bits. Binning de 2x2, 4x4 y 8x8 para mayor sensibilidad.

Tres canales de fluorescencia para rojo, verde y azul, con los siguientes sets de filtros:

Rojo:  Chroma Filter set 49008
Excitación: 560/40, Emision: 630/75
Lista de fluoroforos apropiados:

AlexaFluor 568

FusionRed

mKate2

Sulforhodamine 101

AlexaFluor 594

Killer Red

mRFP1

Texas Red®

CAL Fluor® Red 610

LysoTracker Red/pH 5.2

ReAsH-CCPGCC

Texas Red®-X

Cy3.5

mCherry

Rhodamine Red™-X

TurboFP650

DyLight 594

MitoTracker Red/MeOH

ROX

X-rhod-1/Ca2+

Verde: Chroma Filter set 49002
Excitación: 470/40 , Emisión: 525/50
Lista de fluoroforos apropiados

Acridine Orange + DNA

Cy2™

FAM

mWasabi

Alexa Fluor 488™

DiO

FITC

SYBR® Green I

Atto 465

DyLight 488

Fluo-4

SYTO 9/DNA

Azami Green

EGFP / GFP

LysoTracker Green/pH 5.2

wtGFP

BODIPY FL/pH7.2

Emerald GFP

MitoTracker Green FM/MeOH

ZsGreen1

 

Azul: Chroma Filter set 49000
Excitación: 350/50 , Emisión: 460/50
Lista de fluoróforos apropiados

Alexa Fluor 350™

Coumarin

DyLight 350

LysoTracker Blue/MeOH

Biosearch Blue

DAPI

Hoechst 33258

 

 

Software Stereo Investigator:

StereoInvestigator es un software de trabajo estereológico que utiliza métodos no sesgados para producir resultados. El software usa un sistema de muestreo aleatorio conforme con los protocolos estereológicos mas rigurosos, que acoplado a una platina de movimiento automatizado lo hace un método de conteo eficiente y confiable. Este software is el líder reconocido en herramientas de análisis estereológico y es el sistema más usado, generando 10 veces mas publicaciones científicas que otro producto de estereología.

El software de adquisición y análisis de datos StereoInvestigator actualizado a su versión año 2016. Incluye el modulo Image stack, para análisis de imágenes 3D en stack en el eje z adquiridas con con microscopio confocal, de epifluorescencia o campo claro; y el modulo de reconstrucción 3D serial que adiciona la capacidad de crear y analizar modelos 3D. El software también cuenta con los siguientes estimadores estereologicos: 

- optical fractionator
- physical fractionator - space balls
- Nucleator
- Spatial distribution
- Cavalieri estimator for area and volumen

- Microscopio invertido Olympus IX71 con iluminación LED para CFY y YFP. Software Metamorph NX y Metafluor.

Microscopio invertido Olympus modelo IX71 equipado para campo claro, campo oscuro, contraste de fases y fluorescencia. Cuenta con los siguientes objetivos:

- 10x NA 0.30 UPlan FL N
- 40x NA 0.95 UPlanSApo con collar de corrección

Cámara CCD (Sony) monocromatica enfriada modelo CoolSNAP HQ2, 1392H x 1040V de 1.4 mega pixeles y frame rate de 10 fps (maximo de 104 fps con un binning de 8x8 y ROI). Binning de 2x2, 4x4 y 8x8. Esta cámara esta diseñada para aplicaciones cuantitativas en microscopía de fluorescencia.

Sistema dedicado para FRET: Rueda de filtros externas de rápido cambio para filtros CFP y YFP. Esta combinación de filtros es dedicado para estudios de colocalización, FRET y adquisición de imágenes simultáneas en aplicación a células vivas. Sistema de iluminación LED CoolLED pE, la emisión de cada longitud de onda es controlable de forma precisa de 0 a 100% en tramos de 1%, quitando la necesidad de usar filtros atenuadores de limitado ajuste. Esto también es beneficioso al momento de realizar ensayos ratiométricos ya que cada fuente de longitud de onda puede ser controlada independientemente previo a comenzar el test y se mantendrá constante durante el experimento.Con iluminación de estado solido LED, la emisión de luz es estable en el tiempo, no se requieren periodos de estabilización o enfriamiento de la lampara, y la unidad puede ser encendida y apagada en cualquier momento, produciendo una emisión consistente y predefinida cada vez que se usa.

Dos canales de fluorescencia para amarillo y cyan, la pareja de fluoroforos más usada para experimentos de FRET.

Amarillo: Fuente de luz LED 500nm, mas Chroma filter 89002
Excitación: 500/20, Emisión: 535/30

Cyan: Fuente de luz LED 440nm, mas Chroma filter 89002
Excitación: 430/24, Emisión: 470/24

Software Metamorph NX

Metamorph es el software estándar para adquisición y análisis de imágenes, permite el control de microscopio y análisis de imágenes.

Software MetaFluor

Software de adquisición especializado en mediciones de iones y funciones intracelulares ratiometricas en una o múltiples longitudes de onda. Este software provee una interfaz donde se pueden visualizar los datos sin procesar, la imagen ratiometrica, gráficos de intensidad de señal, y ademas una imagen no ratiometrica como puede ser de campo claro o contraste de fases, para hacer el seguimiento completo del experimento. Dos señales ratiometricas pueden ser adquiridas y medidas simultáneamente. Este software permite análisis y procesamiento de los datos en real-time y también off line luego de haber realizado el experimento. Análisis de regiones ROI pueden ser generadas para monitorear intensidad, valor de la relación entre señales o concentración de iones.

- Multilector Synergy 2 para lectura de placas de 6 hasta 386 pocillos, en técnicas de fluorescencia, luminiscencia y absorbancia.

El multilector de placas Synergy 2 permite 5 modos de detección: fluorescencia, fluorescencia polarizada, fluorescencia de tiempo resuelto (TRF), luminiscencia y absorbancia en el espectro UV-visible. El equipo utiliza una combinación única de monocromador, filtros y espejos dicroicos que entregan el mejor nivel de desempeño en todos los modos de deteccion. Posee tres fuentes luminosas de amplio espectro que han sido elegidas para optima iluminación y excitacion en todas las aplicaciones. El equipo Synergy 2 es manejado desde un computador a través del software Gen 5, el mas moderno y poderoso del mercado.

 

Caracteristicas:

Técnicas de medición: fluorescencia, fluorescencia polarizada, fluorescencia de tiempo resuelto (TRF), luminiscencia incandescente y flash, absorbancia en el espectro UV-visible, FRET, TR-FRET, BRET, área scanning espectral scanning.

Sistema óptico unico: monocromato de banda angosta, optimizado sistema de filtros/espejos dicroicos y 3 fuentes de iluminación para obtener un desempeño superior en todos los modos de lectura.

Alta sensibilidad: elementos ópticos para los resultados  mas bajos en cada modalidad de lectura.

Diseño modular: el usuario puede comprar el modelo que necesita y fácilmente actualizar el equipo para resolver nuevos requerimientos.

Gran capacidad: optimizado para ensayos de screening en formato de placa de hasta 1536 pocillos.

Amplio rango de aplicaciones: dispone de control de temperatura, agitación, inyector dual de reactivos (opcional) para montar virtualmente cualquier ensayo en formato de microplaca.

Nuevo software Gen5: el equipo es manejado desde un computador por el mas poderoso y eficiente software de control, colección de datos y análisis disponible hasta hoy.

Aplicaciones:

Ensayos de union (binding)
Ensayos de canales iónicos
Ensayos de cuantificación de DNA, proteínas.
Ensayos cinéticos
Ensayos de expresión génica (GFP, luciferasa)
Ensayo de ELISA
Ensayos de proliferación celular y cytototxicidad

 

Especificaciones técnicas:

CARACTERISTICAS GENERALES

Metodo de detección

Fluorescencia, Fluorescencia de tiempo resuelto (TRF), Fluorescencia polarizada, luminiscencia, Absorbancia UV-visible

Tipo de microplacas

placas de 6 hasta 1536 pocillos, para detección de luminiscencia placas de hasta 384 pocillos

Control de temperatura

desde temperatura ambiente hasta 50ºC

Agitación

Si

Automatización

Si

SOFTWARE

Software

Gen 5 version 2.07 o superior

DETECCION DE ABSORBANCIA

Fuente de luz

lampara SQ Xenon Flash

Selección de longitud de onda

monocromador

Rango de longitud de onda

200-999 nm, con incrementos de 1 nm

Ancho de banda

 2.4 nm

Rango dinámico

0 - 4.0 OD

Resolución

0.001 OD

Corrección paso óptico

Si

Exactitud de longitud de onda del monocromador

+/- 2 nm

Reproducibilidad de longitud de onda del monocromador

+/- 0.2 nm

Exactitud

< 1% a 2 OD, < 3% a 3.0 OD

Linearidad

< 1% de 0 a 3.0 OD

Reproducibilidad

< 0.5% a 2.0 OD

Dispersion de luz

0.03% a 230 nm

Velocidad de lectura

96 pocillos a 14 segundos, 384 pocillos a 26 segundos, 1536 pocillos a 47 segundos

DETECCION DE FLUORESCENCIA

Fuente de luz

Lampara halogena de tungsteno

Sensibilidad

1 pM de fluoresceína (0.2 fmol/pocilllo 96 pocillos; 0.1 fmol/pocillo 384 pocillos)

Selección de longitud de onda

Deep blocking filtros/ espejos; filtros de emission: 460/40, 528/20 y 590/35 ; filtros de excitacion: 360/40, 485/20 y 530/25

Rango de longitud de onda

200 - 700 nm

Rango dinámico

> 6 ordenes de magnitud

Velocidad de lectura

96 pocillos a 14 segundos, 384 pocillos a 26 segundos, 1536 pocillos a 47 segundos

DETECCION DE LUMINISCENCIA

Sensibilidad

10 amol ATP (flash)

Rango de longitud de onda

300 - 700 nm

Rango dinámico

> 6 ordenes de magnitud

 

Reserva de horas

Los usuarios pueden reservar horas directamente en la siguiente pagina: http://umcim.setmore.com.

Allí podrán elegir el servicio requerido, la fecha de uso y se desplegarán los bloques de hora disponibles en esa fecha. Los servicios son de lunes a viernes de 8:00 a 21:00 horas y sábados de 8:00 a 12:00 horas. Las reservas pueden ser canceladas hasta 24 horas antes de la hora de reserva. El cobro de los servicios se realiza por hora reservada.


Reglamento

1. Responsabilidades de los usuarios

La utilización de los equipos es en régimen de autoservicio, por lo que los usuarios y/o operadores deberán estar capacitados en su uso, para lo cual deberán cumplir con el protocolo de inducción entregado en la primera sesión por el encargado de la Unidad, donde se explicarán las exigencias mínimas de conocimiento en la técnica y operación de los equipos. Aunque la persona tenga experiencia en la técnica, es indispensable haber sido capacitado en el uso del equipo.

 

2. Responsabilidad ante desperfectos por parte del usuario

El académico solicitante (usuario) se hace responsable por daños y perjuicios causados por el uso del equipo, sea el operador directo del equipo alumno de postgrado o pregrado, u otro miembro de su grupo de investigación.

 

3. Publicaciones y reconocimiento

Por orden del proyecto del Ministerio de Educación todo material que se publique tendrá que hacer mención expresa del acceso al equipo, indicando el apoyo del Proyecto Mecesup PUC0815 – Equipamiento Científico Mayor de la Pontificia Universidad Católica de Chile. Los usuarios deberán hacer llegar a la persona encargada de la Unidad la publicación generada para fines estadísticos.

 

4. Reservas

La utilización de los equipos de la Unidad de Microscopía se hará mediante la correspondiente reserva de hora. Dicha petición podrá realizarse a través del correo electrónico Esta dirección electrónica esta protegida contra spam bots. Necesita activar JavaScript para visualizarla y debe especificar la hora de inicio y término de la sesión. Cada sesión puede tener un máximo de 4 horas por persona y una misma persona no puede reservar el mismo equipo más de una vez al día. Las reservas se deben cancelar al menos con un día de anticipación. Si un usuario requiere algún apoyo técnico, deberá comunicarlo expresamente al hacer la reserva del equipo.

 

5. Horario

El uso de los equipos se realiza de lunes a viernes de 08:00 a 21:00 horas y de 08:00 a 12:30 horas el día sábado. El encargado de la Unidad se encuentra disponible de 10:00 a 18:00 horas los días de semana. Solo los usuarios autorizados pueden reservar y hacer uso del equipo cuando el encargado de la Unidad no se encuentra en el edificio.

 

 

Producción científica

Las siguientes publicaciones científicas se han generado con el apoyo otorgado por la Unidad de Microscopía a la investigación.

- Faunes, M., Oñate‐Ponce, A., Fernández‐Collemann, S., & Henny, P. (2015). Excitatory and inhibitory innervation of the mouse orofacial motor nuclei: A stereological study. Journal of Comparative Neurology.

 

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